水稻生长素结合蛋白ABP1的原核表达及纯化

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作   者：

龚蓉;  黄志刚;  王若仲;  黄乐宁;  萧浪涛; 

作者机构：

湖南农业大学植物激素与生长发育湖南省重点实验室; 

关键词：

原核表达;  生长素结合蛋白;  纯化;  水稻; 

期刊名称：

激光生物学报

基金项目：

基于生物传感器的植物激素高灵敏原位实时测定技术研究
商陆高亲和力钾转运体家族基因的分离鉴定及其利用研究

i s s n：

1007-7146

年卷期：

2011 年 020 卷 01 期

页   码：

82-86

摘   要：

生长素结合蛋白能够与生长素特异性结合,因而有可能直接被用作生长素免疫分析和生物传感测定中的高特异性、高亲和力识别分子。本研究通过RT-PCR获得水稻生长素结合蛋白1(ABP1)cDNA,将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,成功构建pET-32a-ABP1重组表达载体。经酶切、PCR及DNA测序鉴定后,将阳性质粒转化表达受体菌E.coil BL21(DE3)。加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导后,取样进行SDS-PAGE和Western Blot分析。结果表明成功表达出一个分子量约为40kD的可溶性融合蛋白,并利用Ni~(2+)-NTA亲和柱一步纯化方式得到了ABP1。