鸭疫里默氏杆菌 Mtan 对底物 SAH 的催化活性研究

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作   者：

吴小卡;  徐达;  荆雅玮;  吕小龙;  胡剑刚;  米荣升;  黄燕;  王成明;  陈兆国;  韩先干; 

作者机构：

中国农业科学院上海兽医研究所^扬州大学兽医学院扬州;  中国农业科学院上海兽医研究所; 

关键词：

S-腺苷同型半胱氨酸;  鸭疫里默氏杆菌;  密度感应系统;  S-腺苷高半胱氨酸核苷酶;  自诱导物质 AI-2; 

期刊名称：

微生物学通报

基金项目：

布鲁氏菌LuxS/AI-2型密度感应系统的构建及其调控机制研究
禽致病性大肠杆菌自诱导信号分子AI-2的摄取及其调控机制研究

i s s n：

0253-2654

年卷期：

2016 年

页   码：

摘   要：

【目的】分析鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)不同血清型pfs基因的序列差异,并开展其编码蛋白S-腺苷高半胱氨酸核苷酶(Mtan,又称Pfs)的催化活性研究。【方法】PCR扩增9株不同血清型RA的pfs基因,分析其核苷酸序列的同源性;构建该基因的重组表达载体p Cold-RA-pfs,表达、纯化RA的重组蛋白Mtan(RA-Mtan);测定RA-Mtan对底物S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosylhomocysteine,SAH)的催化活性,运用哈维弧菌报告菌株BB170检测催化底物的自诱导物2(Autoinducer-2,AI-2)活性。【结果】对RA的pfs序列分析结果表明,不同血清型RA的核苷酸同源性在93.9%-100%之间;SDS-PAGE检测结果表明,RA-Mtan呈可溶性表达;酶活测定表明RA-Mtan和禽致病性大肠杆菌(Avain pathogenic Escherichia coli,APEC)的Lux S蛋白共同作用于底物时,可产生浓度为176.7μmol/L的同型半胱氨酸(Homocysteine,HCY);AI-2活性检测结果表明,产生的AI-2具有生物学活性。【结论】RA不同血清型的pfs高度保守,RA pfs基因的编码产物RA-Mtan在体外具有催化SAH的活性,RA-Mtan和禽致病性大肠杆菌的Lux S蛋白共同作用于底物SAH时,能产生有活性的AI-2,本研究为进一步研究pfs对RA的调控作用提供参考。