拟南芥HyPRP蛋白AZI1在转基因烟草中的亚细胞定位及其对灰葡萄孢的抗性

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作   者：

杜改亮;  高航;  徐子勤; 

作者机构：

西部资源与现代生物技术省部共建教育部重点实验室;  西北大学生命科学学院;  陕西省生物技术重点实验室; 

关键词：

‘秦烟95’;  灰葡萄孢;  亚细胞定位;  AZI1基因;  台盼蓝染色;  DAB染色; 

期刊名称：

植物生理学报

基金项目：

细胞壁蛋白EARLI1亚家族抗性功能研究

i s s n：

2095-1108

年卷期：

2012 年 08 期

页   码：

795-803

摘   要：

通过农杆菌转化法得到了整合有拟南芥AZI1基因的烟草植株,进一步利用转基因烟草分析了AZI1蛋白的亚细胞定位及其对真菌病原体的抗性特征。在上下游引物5'端分别引入NcoI和SpeI酶切位点,采用高保真耐热DNA聚合酶Pfu从拟南芥Col-0生态型基因组DNA扩增AZI1基因的编码序列,用NcoI和SpeI对扩增片段和pCAMBIA1302质粒载体进行双酶切,通过T4DNA连接酶构建产生AZI1-GFP融合表达载体。用包含融合表达载体的农杆菌细胞转化烟草叶片,经潮霉素选择获得了完整的再生植株,并收取了T0代种子。激光共聚焦显微观察发现,AZI1蛋白主要定位于细胞表面。病原体侵染结果显示,AZI1基因能够明显提高烟草对灰葡萄孢的抗性。说明AZI1蛋白通过分泌途径被定位到细胞表面后,能够抑制真菌病原体对植物组织的侵染过程。