水蛭活性肽生物活性测定方法的建立

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作   者：

王雨晴;  张惠惠;  李华健;  李亚男;  吴冬雪;  李喆;  孙志强;  柏道鸣;  宋景;  李双凤;  王少平;  代龙; 

作者机构：

烟台食品药品检验检测中心;  山东中医药大学药学院;  山东禹泽药康产业技术研究院有限公司;  滨州医学院药学院; 

关键词：

水蛭;  改良Fibg-TT法;  活性肽;  生物活性; 

期刊名称：

时珍国医国药

i s s n：

1008-0805

年卷期：

2024 年 35 卷 007 期

页   码：

1648-1651

摘   要：

目的 在体外系统评估三种水蛭活性肽(蚂蟥、柳叶蚂蟥、日本医蛭)的抗凝血活性；并建立新的水蛭活性肽生物活性测定方法。方法 采用体外生物活性测定方法APTT法、PT法、TT法、纤维蛋白原-凝血酶时间(Fibg-TT)法，对蚂蟥活性肽(APP),柳叶蚂蟥活性肽(APA)和日本医蛭活性肽(APH)的活性进行评估。建立新的以水蛭活性肽作为研究对象的生物活性测定体系，通过建立水蛭标准品，定义并测定效价以及考察方法学，建立适合水蛭活性肽的生物活性测定方法。结果 APP,APA和APH均能够显著延长血浆-TT和Fibg-TT时间；由于Fibg-TT法采用纤维蛋白原代替动物血浆，避免了动物个体差异性引起的实验误差。因此，该研究以Fibg-TT为测定方法，通过优化实验，最终选择加入纤维蛋白原含量为0.2%的改良Fibg-TT法建立APP,APA和APH的生物活性评价方法，效价测定结果以及可靠性检验良好；方法学考察结果表明该方法可行性、重复性和准确性较好，并建立完整操作规程，可作为APP,APA和APH的生物活性评价方法。结论 建立了新的水蛭活性肽生物活性测定方法—改良Fibg-TT法，其准确性、重复性和可行性良好，可作为《中国药典》对水蛭生物活性测定方法的补充，并反应水蛭活血化瘀的真正起效物质。