Plackett-Burman实验和响应面法优化酵母源无血清培养基

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作   者：

肖萌;  万莹铚;  张宏岐;  邹坤;  李啸;  邹华蓉;  邓锐; 

作者机构：

湖北宏裕新型包材股份有限公司;  三峡大学生物与制药学院三峡大学天然产物研究与利用湖北省重点实验室;  三峡大学健康医学院;  安琪酵母股份有限公司; 

关键词：

CHO细胞;  Plackett-Burman;  优化;  响应面法;  酵母提取物;  无血清培养基; 

期刊名称：

中国生物制品学杂志

i s s n：

1004-5503

年卷期：

2024 年 008 期

页   码：

989-995,1001

摘   要：

目的 采用Plackett-Burman实验和响应面法（response surface methodology,RSM）优化酵母源无血清培养基（serum-free medium,SFM）的营养组分，明确培养基成分及浓度。方法 以中国仓鼠卵巢细胞（CHO）为研究对象，在实验室前期筛选出的SFM的基础上，采用Plackett-Burman实验对10种营养组分进行筛选。筛选出对细胞具有促生长作用的因素后，利用RSM进行二次优化，以阐明各变量间的相互作用，确定促CHO细胞生长的最佳培养基组成。取对数生长期CHO细胞，用优化后的培养基重悬后，进行传代扩增。结果 经Plackett-Burman实验筛选的10个变量中，酵母抽提物（yeast extract,YE）FM888和微量元素能有效提高细胞比生长速率；非必需氨基酸和FM888对提高细胞存活天数作用显著；FM888、必需氨基酸、非必需氨基酸及微量元素能显著提高活细胞密度。综合选择FM888、微量元素和非必需氨基酸3个因素进行RSM优化试验。优化后的培养基悬浮培养CHO细胞时，其最大比生长速率可达0.025/h，存活天数可达6 d，最大活细胞密度可达7.187×106个/mL。将优化后的培养基进行细胞稳定传代试验，可稳定传代12代，其活细胞密度及细胞活率与对照组（商业化SFM）接近。结论 成功获得成分明确且能支持CHO细胞高密度生长的酵母源SFM，为YE在动物细胞培养中的应用以及高效SFM的开发提供了参考和依据。