抗犬细小病毒纳米抗体的制备及其中和活性鉴定

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作   者：

任泽恒;  皮雪磊;  夏安然;  孙悦;  胡昌辉;  任桂萍; 

作者机构：

东北农业大学生命科学学院; 

关键词：

细菌展示;  抗体活性;  犬细小病毒(CPV);  纳米抗体; 

期刊名称：

中国畜牧兽医

i s s n：

1671-7236

年卷期：

2022 年 49 卷 009 期

页   码：

3539-3548

摘   要：

[目的]建立抗犬细小病毒(CPV)纳米抗体(Nb)库,从中筛选出具有中和活性的Nb.[方法]以高免比格犬脾脏组织cDNA进行重链可变区(VH)扩增,与pBSD载体连接,构建pBSD-Nb库.结合细菌展示、流式细胞仪检测,在pBSD-Nb库中筛选高亲和力的Nb,获得阳性克隆并测序.利用Primer Premier 5.0软件设计Nb基因的上、下游引物,将阳性克隆质粒中Nb基因片段进行PCR扩增.利用pET-27b表达目的蛋白,通过变性、复性手段纯化目的蛋白,用SDS-PAGE分析纯化后的蛋白.将Nb包被96孔板,采用ELISA法检测Nb对CPV的亲和力.通过病毒微量中和试验检测Nb抑制CPV感染猫肾细胞(F81)的情况.[结果]PCR扩增结果显示,在384 bp处可见明显条带,与预期大小相符,证明pBSD-Nb库构建成功.细菌展示后,流式细胞术检测结果显示,有9株阳性峰偏移率高的Nb,分别命名为Nb1、Nb2、Nb3、Nb4、Nb5、Nb6、Nb7、Nb8和Nb9.PCR扩增9株Nb基因片段,获得384 bp的条带.SDS-PAGE结果显示,在约14 ku处有一条带,说明成功获得纯化蛋白.ELISA检测结果表明,9株Nb中有6株Nb对CPV的亲和力较强.体外病毒中和试验检测发现,1株Nb能够中和病毒,抑制F81细胞病变,中和病毒的有效浓度为0.05 mg/mL.[结论]本研究成功建立pBSD-Nb库,筛选出6株对CPV具有高亲和力的Nb,并成功获得1株具有中和活性的Nb,为CPV治疗性抗体制剂的开发提供了新的思路.