利用CRISPR/Cas9技术建立SOST荧光报告基因i PSCs细胞系

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作   者：

于凌佳;  于凌佳;  孟海;  孟海;  杨雍;  杨雍;  林吉生;  林吉生;  范子寒;  范子寒;  李想;  李想;  费琦;  费琦;  李东;  李东; 

作者机构：

首都医科大学附属北京友谊医院骨科中心; 

关键词：

CRISPR/Cas9;  诱导性多能干细胞;  硬骨素基因; 

期刊名称：

临床和实验医学杂志

i s s n：

1671-4695

年卷期：

2020 年 006 期

页   码：

561-565

摘   要：

目的利用CRISPR/Cas9技术构建硬骨素(SOST)基因荧光报告诱导性多能干细胞(i PSCs)细胞株.方法使用PCR检测i PSCs分化过程不同阶段成骨基因的表达.利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将p2A-td TomatoNeo质粒转染至i PSCs细胞.使用PCR凝胶电泳检测转染的效果,而后分别在光镜下观察成骨不同阶段i PSCs的形态变化、茜素红染色及SOST-td Tomato荧光表达情况,并利用茜素红染色及PCR评估转染细胞的成骨效果及成骨基因表达情况.结果 PCR检测结果发现,SOST只在骨细胞中稳定表达,可作为骨细胞的标志性基因.利用CRISPR/Cas9技术将td Tomato插入到SOST终止密码子处,转染后的i PSCs细胞株不影响其成骨效果及SOST基因的表达.结论利用CRISPR/Cas9技术能够成功构建td Tomato-SOST荧光报告基因的i PSCs细胞株.