猫传染性腹膜炎病毒N蛋白的原核表达及多抗制备

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作   者：

牛铮;  徐沙沙;  张静怡;  张依玲;  阚子斐;  张淑娟;  邹宏;  邹卓岚;  冉玲;  宋振辉; 

作者机构：

西南大学动物医学院; 

关键词：

猫传染性腹膜炎病毒;  蛋白表达和纯化;  多克隆抗体制备;  特异性鉴定; 

期刊名称：

西南大学学报(自然科学版)

i s s n：

1673-9868

年卷期：

2021 年 012 期

页   码：

1-9

摘   要：

猫传染性腹膜炎病毒（FIPV）是冠状病毒中的重要成员,也是引起猫传染性腹膜炎的主要病原.参考GenBank数据库中FIPV核衣壳蛋白基因序列,设计特异性引物,以病料组织中提取的RNA为模板,反转录成cDNA,通过PCR特异性扩增N基因序列,将其克隆至pMD19-T载体并转化至Trans5α感受态细胞,经筛选、菌液PCR与限制酶双酶切鉴定后,获得重组克隆质粒pMD19-T-N.以pMD19-T-N为模板,亚克隆N基因,将其与Pet-28a载体连接后转化至表达菌株Rosetta感受态细胞,完成Pet-28a-N重组表达质粒的构建.用IPTG诱导N蛋白表达,将纯化后的重组N蛋白皮下多点注射免疫比利时兔,制备多克隆抗体.最终通过Western-Blot与免疫组化技术检测多克隆抗体的特异性. FIPV N蛋白多克隆抗体的制备,为猫传染性腹膜炎的进一步研究及临床治疗提供了必备的实验材料.