盐泽螺旋藻藻蓝蛋白裂合酶CpcS的分子克隆及功能研究

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作   者：

盛怡;  李慧敏;  伍贤军;  杨红;  朱咏莉;  李萍萍; 

作者机构：

南京林业大学生物与环境学院; 

关键词：

盐泽螺旋藻;  生物合成;  裂合酶;  藻蓝蛋白;  重组表达; 

期刊名称：

农业现代化研究

基金项目：

Cd诱导典型土壤酶Hormesis效应的时间依赖性及机理

i s s n：

1000-0275

年卷期：

2019 年 40 卷 06 期

页   码：

1048-1055

摘   要：

为研究盐泽螺旋藻(Spirulina subsalsa)藻蓝蛋白裂合酶CpcS的催化功能,首先通过PCR技术从S. subsalsa FACHB351基因组DNA中扩增藻蓝蛋白裂合酶的编码基因SscpcS,构建表达质粒pCDFDuet-SscpcS,然后再与脱辅基蛋白和色素合成酶表达质粒pETDuet-SscpcB-Ssho1::SspcyA共同转入大肠杆菌BL21(DE3),并经IPTG(Isopropyl β-D-Thiogalactoside,异丙基硫代半乳糖苷)诱导重组合成藻蓝蛋白。PCR产物测序表明SscpcS扩增成功;双酶切检测和SDS-PAGE电泳分析表明质粒pCDFDuet-SscpcS构建成功,且能表达目的蛋白。重组藻蓝蛋白PCB-CpcB细胞产物为深蓝色;纯化后的色素蛋白展现620 nm的最大吸收峰和646 nm的最大荧光发射峰;色素蛋白通过锌离子染色,在紫外线照射下展现明显荧光。该研究成功克隆源自盐泽螺旋藻的藻蓝蛋白裂合酶SsCpcS的编码基因,其表达产物SsCpcS能有效催化藻蓝蛋白的生物合成。此研究为S. subsalsa藻蓝蛋白的重组合成及抗氧化试剂的研制奠定基础,也为探明盐泽螺旋藻中CpcS的催化机理提供科学依据。