衣原体转录激活因子GrgA与RNA聚合酶α亚基相互作用机制

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作   者：

石禹;  窦志华;  包小峰; 

作者机构：

南通大学药学院;  南通市第三人民医院南通大学附属南通第三医院药学部; 

关键词：

牵出试验;  相互作用;  基因通用调节因子A;  融合蛋白;  亚基;  衣原体;  衣原体RNA聚合酶; 

期刊名称：

中华医院感染学杂志

i s s n：

1005-4529

年卷期：

2025 年 35 卷 001 期

页   码：

1-6

摘   要：

目的 研究衣原体基因转录调控过程中基因通用调节因子A(GrgA)与RNA聚合酶(RNAP)α亚基相互作用的关系，以提高GrgA和RNAP参与衣原体转录和调控机制的认识。方法 本研究通过引物设计，采用聚合酶链反应(PCR),构建携带His或Strep蛋白标签的衣原体RNA聚合酶(cRNAP)α亚基和GrgA的各种融合蛋白表达载体，将表达载体转入ArcticExpress表达菌株的化学感受态细胞菌株，通过异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导13℃低温表达相应蛋白，借助体外蛋白牵出试验(Pull-down技术)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白质印迹法(WB)分析鉴定出GrgA与cRNAP α亚基两者间相互结合的较为详细的某一段氨基酸序列。结果 cRNAP α亚基能与GrgA结合，GrgA与α△(277-377)有结合，与α△(1-259)无结合；α亚基与GrgA△(1-64)、GrgA△(65-112)、GrgA△(114-165)、GrgA△(166-206)、GrgA△(207-268)均有结合。结论 GrgA能与cRNAP α亚基结合；cRNAP α亚基与GrgA的结合位点位于α亚基N末端的1-259位氨基酸序列；GrgA通过多个氨基酸序列位点与cRNAP α亚基结合；cRNAP α亚基的N末端可能同样参与了转录调控过程。