转录因子Runx2调控前成骨细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子的表达

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作   者：

孙玉娇;  宫春梅;  郝建忠;  孙岩;  刘晓影; 

作者机构：

潍坊医学院口腔医学院;  潍坊医学院;  潍坊医学院附属医院; 

关键词：

组织构建;  定时定量RT-PCR;  骨细胞;  MAP激酶激酶激酶类;  信号传导;  信号通路;  双荧光素酶基因检测;  细胞外基质蛋白质类;  国家自然科学基金;  细胞外基质磷酸化糖蛋白;  组织工程;  Runx2; 

期刊名称：

中国组织工程研究

基金项目：

MSX2在牙釉质发育过程中的功能及其调控机制研究

i s s n：

2095-4344

年卷期：

2015 年 37 期

页   码：

5905-5910

摘   要：

背景:细胞外基质磷酸化糖蛋白基因在骨的矿化和吸收、成骨细胞与破骨细胞的平衡中起重要的作用,研究细胞外基质磷酸化糖蛋白的功能及其调控机制可为骨质疏松症的治疗提供新的思路。目的:分析转录因子Runx2在小鼠前成骨细胞中对细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子的调控作用,进而初步研究转录因子Runx2在骨形成发育过程中的作用。方法:首先根据Genbank中Runx2的基因序列构建Runx2真核表达载体;然后利用双荧光素酶基因检测报告系统分析Runx2对不同长度的细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子转录活性的影响,以确定Runx2有明显作用的启动子区段,分析3种MAPK信号通路抑制剂调控Runx2对细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子转录活性的影响;最后利用定时定量RT-PCR法分析Runx2对细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子表达活性的影响。结果与结论:成功构建Runx2真核表达载体;双荧光素酶基因检测报告系统分析显示Runx2能够上调细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子在前成骨细胞中的转录活性,在(-300-+66)366 bp片段区域内上调效果较为显著,Runx2可通过激活MEK激酶MAPK通路上调细胞外基质磷酸化糖蛋白启动子活性;定时定量RT-PCR法检测再次验证Runx2上调细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子的表达水平。提示转录因子Runx2可以通过MEK激酶MAPK信号通路对细胞外基质磷酸化糖蛋白基因表达进行调节,为探讨细胞外基质磷酸化糖蛋白在骨形成发育过程中的意义奠定基础。