新城疫病毒F蛋白和禽致病性大肠杆菌OmpA嵌合蛋白的表达及双特异性抗体制备

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作   者：

袁橙;  王永娟;  郭梦娇;  刘思琪;  周雨豪; 

作者机构：

江苏农牧科技职业学院动物医学院;  扬州大学兽医学院; 

关键词：

原核表达;  大肠杆菌OmpA蛋白;  嵌合蛋白;  多克隆抗体;  新城疫病毒F蛋白; 

期刊名称：

黑龙江畜牧兽医

i s s n：

1004-7034

年卷期：

2024 年 001 期

页   码：

103-108

摘   要：

为获得Ⅶ型新城疫病毒（Newcastle disease virus, NDV）融合蛋白（fusion protein, F蛋白）和O18型禽致病性大肠杆菌（avian pathogenic Escherichia coli,APEC）外膜基因A（outer-membrane proteases, OmpA）嵌合蛋白和双特异性抗体，试验首先采用基因合成技术获得Ⅶ型NDV F基因和O18型APEC的OmpA基因片段，使用同源重组技术将F基因插入到OmpA基因中，再将重组基因片段插入到原核表达载体pGEX-4T-1中构建嵌合表达质粒，对重组质粒中的插入基因序列进行测序鉴定；将序列正确的嵌合表达质粒转入大肠杆菌BL21（Rosetta）感受态细胞中，利用IPTG诱导嵌合蛋白表达，使用SDS-PAGE和Western-blot检验嵌合蛋白的表达情况；纯化嵌合蛋白后免疫兔获得抗血清，抗血清再经抗原亲和纯化层析柱纯化获得多克隆抗体，采用间接酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）测定抗体效价。结果表明：成功合成了Fo和OmpA1、OmpA2基因片段，构建并表达了重组质粒pGEX-O1-Fo-O2,纯化后的嵌合蛋白O1FoO2在大肠杆菌中以包涵体形式存在，制备的多克隆抗体对O1FoO2的效价约为1.1×10~6,对GST的效价约为4.1×10~4。说明制备的嵌合蛋白和双特异性抗体质量较好。