细粒棘球蚴抗原B8/2蛋白单抗的制备及夹心ELISA检测方法的建立

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作   者：

朵红;  付永;  沈秀英;  郭志宏;  张学勇;  马怡隽; 

作者机构：

青海省畜牧兽医科学院; 

关键词：

细粒棘球蚴抗原B8/2蛋白;  夹心ELISA;  单克隆抗体; 

期刊名称：

动物医学进展

i s s n：

年卷期：

2021 年 010 期

页   码：

31-36

摘   要：

为建立一种早期诊断动物细粒棘球蚴病的方法,诱导表达含PET-EgAgB8/2载体的原核表达菌,以表达纯化蛋白为抗原,制备单克隆抗体,并以制备的抗体建立检测细粒棘球蚴病夹心ELISA方法。结果显示,原核表达菌在37℃诱导培养,菌体上清中大量表达,经验证为目的蛋白,用纯化蛋白免疫小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,筛选得到9株具有良好特异性、稳定分泌单克隆抗体的细胞株,经两两配对,选择75C86/15作为包被抗体,27E57/32为酶标二抗,当包被抗体浓度为1.42μg/mL, 4℃包被过夜、用含50 g/L脱脂奶粉的PBST封闭、抗原作1∶100稀释、酶标二抗1∶1 000稀释、反应底物作用15 min时效果最佳,检测方法的特异性为98.8%,敏感性为95.3%。成功制备细粒棘球蚴抗原B8/2蛋白单克隆抗体并建立了ELISA检测方法。