嗜热革节孢内切葡聚糖酶EGⅠ中精氨酸Arg7的功能分析

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作   者：

于伟帅;  李多川; 

作者机构：

山东农业大学植物保护学院; 

关键词：

酶学性质;  热稳定性;  内切葡聚糖酶;  饱和突变;  嗜热革节孢; 

期刊名称：

山东农业科学

基金项目：

植物病原真菌纤维素酶与植物互作的分子机制

i s s n：

1001-4942

年卷期：

2020 年 02 期

页   码：

19-26

摘   要：

本研究将嗜热革节孢GH45家族内切葡聚糖酶EGⅠ中的底物结合位点精氨酸Arg7进行饱和突变,测定其性质、动力学参数的变化,以期分析精氨酸Arg7的功能。结果表明,与原酶相比,突变酶R7A的K_m有所下降,R7P的k_(cat)显著性提高,但突变酶的k_(cat)/K_m均显著性降低。原酶的最适反应温度为50℃,突变酶R7C、R7P和R7V的则为40℃,其余突变酶的均为50℃。原酶于70℃下处理2 h具有61%的活性,相同处理条件下,突变酶R7F、R7H仍具有70%以上的活性,说明其热稳定性明显提高,R7A仅有20%的活性,剩余突变酶均有40%左右的活性。原酶的反应最适pH值为5. 0,而突变酶R7C的为6. 0,剩余突变酶的均为5. 0。本试验探究了精氨酸Arg7饱和突变后嗜热革节孢GH45家族内切葡聚糖酶的性质变化,可为GH45家族进一步的分子改造和功能研究提供参考。