托佩克猪SLA-3原核表达载体构建及表达

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作   者：

曹青青;  张永春;  李春鹏;  高凤山; 

作者机构：

大连大学生物工程学院;  大连大学生命科学与技术学院河北省怀安县畜牧局; 

关键词：

托佩克猪;  构建;  SLA-3;  原核表达载体; 

期刊名称：

生物技术

基金项目：

猪源病毒CTL多肽表位与SLA-I结晶研究

i s s n：

1004-311X

年卷期：

2014 年 05 期

页   码：

25-28

摘   要：

目的:研究托佩克猪SLA-3-TPK的原核表达载体的构建及蛋白表达。方法:设计引物扩增SLA-3-TPK胞外区(命名为SLA-3-TPKe),并将此片段克隆至p MD19-T Simple Vector,经双酶切筛选阳性克隆测序,序列正确的克隆片段与表达载体p ET-21a(+)连接,转化宿主菌BL21,并经过诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白的表达。结果:PCR成功扩增获得SLA-3-TPke,大小约为850bp,酶切后插入片段大小约为830bp,经克隆测序,阳性克隆序列与原序列一致,双酶切鉴定证实目的基因与p ET-21a(+)成功连接,经过IPTG诱导表达和SDS-PAGE检测,结果显示目的基因成功表达且目的蛋白大小约为31k Da。结论:该研究成功构建了托佩克猪SLA-3原核表达载体,获得了表达蛋白,为今后进一步的结构和功能研究奠定基础。