热带剥爪螨变应原Blot 5的克隆表达、纯化及免疫学鉴定

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作   者：

蔡俊龙;  杨彬;  邓宜红;  陈实;  罗慕侠;  李勤;  付永锋;  程训佳; 

作者机构：

复旦大学上海医学院病原生物学系; 

关键词：

Blot 5;  重组变应原;  IgE;  蛋白表达;  热带剥爪螨; 

期刊名称：

中国免疫学杂志

基金项目：

利用三重态发光提高LEDs的量子效率

i s s n：

1000-484X

年卷期：

2012 年 28 卷 08 期

页   码：

690-694

摘   要：

目的:克隆热带剥爪螨主要变应原Blot 5基因,表达纯化该蛋白,并检测其免疫活性。方法:提取热带剥爪螨总RNA,采用RT-PCR的方法扩增Blot 5编码基因,将其连入原核表达载体pET-19b,将重组质粒转化入大肠杆菌BL21 Star(DE3)pLysS,IPTG诱导表达后,通过Ni2+亲和层析纯化重组变应原Blot 5。用Dot blot、Western blot和ELISA等方法检测重组变应原Blot 5免疫活性。结果:Dot blot和Western blot结果表明重组变应原Blot 5和热带剥爪螨粗提液都能和Blot 5鼠单克隆抗体结合。重组变应原Blot 5检测69份热带剥爪螨过敏患者血清和21份户尘螨过敏患者血清中的特异性IgE,阳性率分别为29.0%和33.3%。结论:表达和纯化了具有与天然蛋白相似的免疫活性的重组热带剥爪螨变应原Blot 5,可用于热带剥爪螨变应原的标准化,为标准化抗原的临床特异性诊断与治疗奠定基础。