长双歧杆菌蔗糖磷酸化酶的异源表达及其酶学性质

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作   者：

项蓉;  杨金山;  娄婷婷;  吴子健;  张宏宇;  赵彦巧;  王丹芸;  张得光;  马兴; 

关键词：

酶学性质;  异源表达;  大肠杆菌;  蔗糖磷酸化酶;  转糖基化活力; 

期刊名称：

食品研究与开发

i s s n：

1005-6521

年卷期：

2024 年 45 卷 005 期

页   码：

196-204

摘   要：

为挖掘来源于长双歧杆菌的蔗糖磷酸化酶(Bifidobacterium longum sucrose phosphorylase,BloSPase)合成 2-O-α-D-吡喃葡糖基-L-抗坏血酸(2-O-α-D-glucopyranosyl-L-ascorbic acid,AA-2G)的潜力,该研究将BloSPase基因在大肠杆菌中异源表达,以BloSPase的水解酶活力为指标,通过单因素试验和响应面法对其表达条件进行优化;并通过镍柱纯化后对其转糖基化活力进行研究.结果表明,BloSPase的最佳表达条件为诱导时间 10 h、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galactoside,IPTG)浓度 0.47 mmol/L、诱导温度 23℃.在该条件下,水解酶活力可达到(730.35±0.58)U/mL,比酶活达到(95.22±2.45)U/mg.酶学性质研究显示,BloSPase转糖基化活力的最适反应温度为50℃,最适反应pH值为 5.2,在 40、50℃时表现出较强的热稳定性.其动力学参数Km值为(266.80±23.76)mmol/L,Vmax值为(0.235 0±0.009 9)mmol/(L·min).