副结核分支杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

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作   者：

平宇明;  张宏莉;  班亚星;  刘建奇;  任希恩;  邬彩丽;  刘东霞;  徐丽媛;  杨雪娇;  常华;  李劼; 

作者机构：

云南农业大学动物医学院; 

关键词：

检测方法;  实时荧光定量PCR;  感染调查;  副结核分支杆菌; 

期刊名称：

动物医学进展

i s s n：

1007-5038

年卷期：

2024 年 45 卷 007 期

页   码：

1-6

摘   要：

为加强副结核分支杆菌(MAP)的检测、监测与防控,建立MAP荧光定量PCR(qPCR)检测方法,根据国内MAP流行菌株特异性插入序列IS900设计1对特异性引物和探针,构建重组阳性质粒用作建立qPCR的模板,优化反应体系和条件,验证该方法的特异性、敏感性和重复性.结果显示,该方法最低检测限为5拷贝/μL;重复试验中批内和批间变异系数均小于4%;与牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛轮状病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛支原体、肺炎克雷伯菌和曼氏杆菌等病原检测无交叉反应,能特异性检出MAP.应用建立的qPCR开展了内蒙古自治区6个市的MAP临床样品检测和流行情况分析,结果显示MAP平均阳性率为0.85%(6/704).结果表明,成功建立了 MAP的实时荧光定量PCR检测方法,可用于临床中MAP的监测和调查,为MAP疾病诊断与监控提供了快捷的方法.