东北民猪体细胞核移植及绿色荧光蛋白转基因猪研究

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获奖名称：

科学技术奖

获奖区域：

黑龙江省

获奖等级：

一等奖

主要完成人：

刘忠华; 李玉田; 王洪斌; 宋军; 尹智; 田江天; 郑重; 王振坤; 孔庆然; 孙爽; 马海鲲; 高力; 范洪刚

关键词：

细胞核;  蛋;  东北民猪;  转基因;  体细胞;  细胞核移植;  荧光;  核移植;  民猪;  蛋白;  体细胞核移植;  绿色;  转基因猪;  体细胞核;  细胞;  荧光蛋白;  移植;  东北;  猪;  绿色荧光蛋白;  研究;  基因;  猪体细胞核移植; 

第一完成单位：

东北农业大学

获奖时间：

2009

项目名称：

东北民猪体细胞核移植

联系人：

刘忠华

联系电话：

13796078908

电子邮件：

liu086@yahoo.com

邮编：

地址：

黑龙江省哈尔滨市香坊区公滨路木材街59号

合作完成单位：

哈尔滨市三元畜牧实业有限公司

单位电话：

0451-55190055

传真：

0451-55190651

网址：

推荐单位(专家)：

黑龙江省教育厅

摘要：

　　本研究针对猪体细胞核移植的特殊性，为建立稳定的体细胞核移植猪的技术体系以及基于体细胞核移植的转基因猪技术体系，主要开展了如下的研究内容： 　　1、卵母细胞体外成熟培养体系建立； 　　2、东北民猪、大白猪和长白猪体细胞采集培养及冷冻保存； 　　3、体细胞核移植胚胎的构建与体外发育体系建立； 　　4、体细胞核移植胚胎的胚胎移植及全程发育； 　　5、绿色荧光蛋白基因转染体细胞方法的筛选； 　　6、绿色荧光蛋白转基因阳性细胞的体细胞核移植以及早期胚胎发育过程中的基因表达检测； 　　7、绿色荧光蛋白转基因猪胚胎移植以及全程发育； 研究结果表明添加10%的pFF和FBS显著（P＜0.05）提高了卵母细胞成熟率；添加pFF组的囊胚细胞核数显著（P＜0.05）高于其它组的囊胚细胞核数；体细胞核移植胚胎移植入受体后，有3头受体发育到期，获得克隆东北民猪14头，其中有6头健康成活。GFP转基因体细胞重构胚体外囊胚发育率为10%，GFP阳性胚胎率为48%；重构胚移植于10头受体后，有5头妊娠，3头受体发育到期，共产出克隆猪6头，其中4头为GFP阳性，经DNA检测进一步确认为GFP转基因猪；转基因克隆胚胎移植出生率为1.0%，阳性个体出生率为0.7%。 　　本次实验所获得的体细胞核移植东北民猪是国内首次成体体细胞克隆猪，GFP转基因猪也是中国首例转基因猪。该研究在卵母细胞体外成熟、胚胎移植手术、受体母猪的选择和管理等方面创新明显，项目总体研究水平达到国际先进。 　　该研究成果为我国地方猪种保护，猪的转基因育种等工作打下了坚实的基础，增强了我国在该领域的国际竞争力。