家禽重要传染病基因工程疫苗创制与产业化

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获奖名称：

神农中华农业科技奖科学研究类成果

获奖区域：

中国农学会

获奖等级：

二等奖

主要完成人：

田克恭; 田国彬; 范书才; 陈红英; 刘武杰; 逄文强; 张许科; 赵坤坤; 黄玉欣; 洪素梅; 李向东; 曾显营; 李虹; 廖永洪; 朱良全

关键词：

创制;  灭活疫苗;  蛋白;  疫苗株;  鸭瘟;  抗原;  基因工程;  传染病;  创建;  疫苗; 

第一完成单位：

普莱柯生物工程股份有限公司

获奖时间：

2018-2019

项目名称：

联系人：

联系电话：

电子邮件：

邮编：

地址：

合作完成单位：

普莱柯生物工程股份有限公司; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 中国兽医药品监察所; 河南农业大学; 洛阳惠中生物技术有限公司; 乾元浩生物股份有限公司; 扬州优邦生物药品有限公司

单位电话：

传真：

网址：

推荐单位(专家)：

来源网站：

中国农学会

来源网址：

http://www.caass.org.cn/

摘要：

1、研究背景我国是世界第一家禽养殖与消费国，家禽传染病严重制约产业健康发展，疫苗是传染病防控的有效手段，现有疫苗在种毒/抗原、佐剂、工艺、成本及应用等方面存在着诸多缺陷。本项目历经12年科技攻关，创制基因工程多联疫苗，为我国养禽业健康发展、动物源性食品安全和公共卫生安全提供了保障。2、主要技术方案和内容 针对禽流感、鸡新城疫等6种家禽重要传染病，建立反向遗传技术平台并构建新型疫苗株，创建大肠杆菌原核表达与蛋白纯化技术，攻克佐剂、抗原浓缩纯化等疫苗研制核心工艺，创制基因工程疫苗并推广应用。3、主要科技创新点创新点一：创建了H9亚型禽流感、基因Ⅶ 型新城疫2种反向遗传关键技术，构建了新型疫苗株，创制新型基因工程多联疫苗。（1）发现广谱抗原性的野生型禽流感毒株CK/HuN/33/08，反向遗传构建疫苗株Re-9，突破了野生型毒株鸡胚生长滴度低、生物安全性差的自身缺陷，解决了现用疫苗株与流行毒株同源性低的现实问题，成功创制出全球首个基因工程新支流三联灭活疫苗。（2）创建基因Ⅶ 型新城疫病毒反向遗传操作技术，成功拯救出弱毒疫苗株N7a，解决了传统疫苗株与流行株基因型不匹配的技术难题，并率先创制基因Ⅶ 型新城疫系列新支流三联、新流法三联及新支流法四联灭活疫苗。创新点二：攻克蛋白原核表达等6种核心技术，创制基因工程亚单位系列多联疫苗。（1）突破大肠杆菌表达鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白易形成包涵体的技术瓶颈，实现了蛋白的可溶性高效表达；创建双水相系统萃取与盐析沉淀相结合的蛋白纯化工艺，有效去除内毒素；运用切向流技术控制蛋白四级结构，实现了病毒样颗粒的高效组装，创制出基因工程亚单位三联和四联灭活疫苗，市场占有率均位居国内第一。（2）筛选获得I群禽腺病毒强毒株并建立感染模型与发病标准，发现I群禽腺病毒Fiber-2蛋白是主要免疫原性蛋白，国际首次实现Fiber-2蛋白在大肠杆菌的高效可溶性表达，抗原生产成本较传统细胞培养工艺下降98%，解决了传统细胞培养生产成本高，工艺复杂的技术难题，率先创制新支流腺四联灭活疫苗。创新点三：突破佐剂等4种疫苗研制关键核心技术，创制肉鸡专用及水禽新型疫苗。（1）发明新型佐剂，克服了现有油佐剂对硬脂酸铝的高度依赖性，降低了疫苗粘度与注射应激，提高了疫苗的体内吸收能力；建立了“粗滤+超滤”的抗原高效浓缩工艺，创制出肉鸡专用新流二联灭活疫苗，解决了传统疫苗免疫产生期长、剂量大、代谢吸收慢等技术难题。（2）创建鸭瘟毒种培育技术与抗原制备工艺，攻克了鸭瘟病毒抗原产量低的关键技术难题，全球首创鸭瘟灭活疫苗，结束了我国鸭瘟防控无灭活疫苗可用的历史。进一步突破了H9亚型禽流感疫苗在鸭上效力评价难等技术瓶颈，创制出“鸭瘟、禽流感（H9）二联灭活疫苗”，填补了国际空白。4、授权专利和知识产权获授权发明专利15项（美国发明专利1项），国家新兽药证书4项（二类1项），制定产品标准4项，发表论文44篇。5、总体经济技术指标与同类技术比较创制的全球首个基因工程新支流三联灭活疫苗采用基因重组疫苗株Re-9，较传统野生型疫苗株生物安全性高，增殖性能好。鸡传染性法氏囊病系列亚单位疫苗的血清学效力检验标准、免疫攻毒法标准、内毒素标准均高于同类产品。禽腺病毒亚单位抗原技术采用大肠杆菌表达，抗原生产成本仅为全病毒细胞培养工艺的1.7%。新流二联灭活疫苗血清学效力检验标准高于同类产品，使用剂量低于同类产品。“鸭瘟灭活疫苗”及“鸭瘟、禽流感（H9）二联灭活疫苗”均为国际首创。经第三方成果评价，总体技术水平国际先进。6、成熟度与推广应用本成果创建核心技术12种，创制国家新兽药4项，获生产批准文号8个。产品在全国28个省份推广应用8年，累计应用疫苗28.41亿羽份，实现销售额3.64亿元，总经济效益达311.96亿元。成果的实施建立健全了我国家禽重要传染病的防控技术体系，为家禽产业的持续健康发展、禽源性食品安全和公共卫生安全提供了强有力的技术和产品保障。