食品中单核细胞增生李斯特菌PCR快速检验方法

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获奖名称：

科学技术进步奖

获奖区域：

吉林省

获奖等级：

三等奖

主要完成人：

刘桂华; 李波; 方丽; 乔凤; 匡荣梅; 张历; 王文; 刘长洁; 白翠华; 杨红

关键词：

单核细胞;  检验方法;  方法;  单核细胞增生李斯特菌;  单核;  李斯特菌;  快速检验;  食品;  李;  细胞;  快速;  检验;  增生;  验方; 

第一完成单位：

吉林省疾病预防控制中心

获奖时间：

2005

项目名称：

联系人：

刘桂华

联系电话：

0431-5957804;7976965

电子邮件：

liugh0523@sina.com

邮编：

地址：

吉林省长春市绿园区景阳大路3145号

合作完成单位：

吉林大学公共卫生学院; 吉林油田防疫站; 吉林市疾病预防控制中心; 吉林省卫生厅卫生监督所

单位电话：

0431-87970565;87980145

传真：

0431-87976967

网址：

推荐单位(专家)：

摘要：

　　李斯特氏菌广泛存在于自然界，并可污染多种食品，尤其是单核细胞增生李斯特氏菌经常使人和动物致病。该菌能在低于0℃的温度下生存并繁殖，而且该菌对年老体弱、婴幼儿、孕妇，免疫功能低下的人群易于感染，可引起人和动物的脑膜炎、脑炎、败血症、心内膜炎及食物中毒，感染入血后，病死率较高，还可使孕妇流产或胎儿致畸。李斯特氏菌病是一种重要的人畜共患病，对人的致病作用正日益受到重视，FDA、WHO等组织都相继成立了相应的机构或规定相应的策略去预防和控制该菌的污染、传播。 　　近几年来，许多国家从多种食品中分离到李斯特氏菌或因李斯特氏菌污染食品引起暴发性食物中毒的事件，为此李斯特氏菌已成为新的重要的食源性疾病的病原菌，严重影响人民的身体健康，已引起了有关国际组织和各国政府的高度重视。因此，我国加入了世界卫生组织的全球污染物监测网，我省作为全国十个污染物监测网点之一，每年担负着大量样品的监测检验及方法的研究任务。几年来，在李斯特氏菌的方法研究中，我们在该菌的增菌、分离及生化学鉴定方法上做了大量的研究工作，但在分子生物学方面的研究刚刚起步。为了更好地完成食品中污染物监测任务及迎接加入WTO的挑战，促使我国早日加入全球PulseNet（分子生物学）网络系统，急待提高单增生李斯特氏菌的检测能力和水平，为减少贸易壁垒，与国际接轨，建立适合工作需要的快速检验方。 　　针对单和细胞增生李斯特菌所特有的特异性溶血素“O”（hlyA）基因序列设计引物进行基因片段的大量扩增；在标本中快速提取DNA作为扩增反应的模板；加入四种脱氧核苷三磷酸（（dNTPs）作为合成DNA片段的原料；在耐热DNA聚合酶的作用下，在合适的离子、缓冲液及温度条件下催化合成DNA，并保证反应的产量和质量，最终利用凝胶电泳法检测PCR的结果。法势在必行。 　利用该方法本实验室对鲜禽畜肉、熟肉、100多份样品及几十株标准菌株进行单增李斯特氏菌的检测及鉴定，效果非常好。完成了2002年国家指导实验室的室间质控菌种的鉴定工作，符合率100%.该项方法已通过微生物及有关专家鉴定，2004年11月已由吉林省技术监督局批准，做为吉林省地方标准（DB22/T390-2004）发布实施。将指导全省相关食品企业和检验机构的检验工作，适用于大批样品的监测及可疑食物中毒样品的快速诊断。该方法填补了省内空白，在国内处于领先地位。它为我们今后单增李斯特氏菌的分子生物学检测方法的研究奠定了基础。