高致病性猪蓝耳病单克隆抗体的制备及免疫胶体金试纸的研制

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获奖名称：

科技进步奖

获奖区域：

大连市

获奖等级：

二等奖

主要完成人：

吴斌; 肈慧君; 贾赟; 王玫; 胡传伟; 张雪; 高阳; 刘霞; 秦成; 李宪臻; 赵前程; 邹明强; 王伟利; 王晶; 钱斯日古楞

关键词：

致病;  单克隆抗体;  克隆;  试纸;  免疫胶体金;  高致病性猪蓝耳病;  金;  胶体;  蓝耳病;  纸;  胶体金;  高致病性;  猪蓝耳病;  胶体金试纸;  耳病;  单克隆;  研制;  抗体;  免疫;  致病性;  猪;  制备; 

第一完成单位：

辽宁出入境检验检疫局

获奖时间：

2011

项目名称：

高致病性猪蓝耳病单克隆抗体的制备及免疫胶体金试纸的研制

联系人：

科技处

联系电话：

0411-82583329

电子邮件：

邮编：

地址：

辽宁省大连市中山区人民路81号

合作完成单位：

大连海洋大学; 中国检验检疫科学院; 吉林出入境检验检疫局; 大连工业大学

单位电话：

0411-82583899;82583161

传真：

0411-82583674

网址：

推荐单位(专家)：

大连市科技局

摘要：

免疫层析法是近几年来兴起的一种快速诊断技术，其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素一端浸入样品后，由于毛细管虹吸作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，若用免疫胶体金或免疫酶染色可使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断。与其他快速诊断技术(如ELISA、HPLC、RIA 等)相比，胶体金技术由于快速简便、特异敏感、稳定性强、不需要特殊设备和试剂、结果判断直观等优点，目前已在快速检测领域得到广泛应用，并显示出了极大的潜力。免疫胶体金技术已应用于各个检测领域，特别在医学领域、动物医学方面也有一些疫病检测金标试纸条，但至今国内外尚未有高致病性蓝耳病免疫金标试纸条相应研究报道及产品的出现。 基于以上原因，本研究在高致病性猪蓝耳病单克隆抗体技术、胶体金免疫层析技术和新材料技术基础上发展起来的一项新型体外诊断技术。本研究以纯化的灭活高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)为免疫原，采用长程免疫法制备出1株亲和力高、稳定性好、效价高的抗HP-PRRSV单克隆抗体。采用柠檬酸三钠还原法制备特定大小、均一、稳定的胶体金颗粒，以此胶体金标记纯化的抗HP-PRRSV多抗作为捕捉抗体喷涂在玻璃纤维膜上，将纯化的抗HP-PRRSV单克隆抗体和羊抗鼠IgG抗体包被在硝酸纤维素膜上，分别作为金标试纸条的检测线和质控线，同时优化各组成成分反应条件，进而组装成胶体金标免疫层析试纸条。同时对该金标试纸条的效果依次做阴阳性检测试验、敏感性试验、特异性试验、重复性试验及稳定性试验进行分析、比较及验证。 利用该高致病性猪蓝耳病病毒抗原免疫金标试纸条，在临床应用检测样品时，由于两种抗体组分的存在下，既能有效地保证了该试纸条的特异专一性，又能使阳性样品不漏检。应用该试纸条对送检的来自辽宁、上海、江苏、山东7个养殖厂的猪肺脏、脾脏及淋巴结样品共计60份临床样品检测，同时与农业部推荐的高致病性蓝耳病RT-PCR诊断试剂盒的方法进行符合性比较验证，结果显示两种方法检测结果的符合性达91%(10/11)，证明本研究制备的高致病性猪蓝耳病抗原免疫金标试纸条具备敏感、特异的优势，同时检测时间大大缩短为十几分钟，这种快速便捷的检测高致病性猪蓝耳病的新型检测技术使其具备广阔的应用前景，尤其适用于基层兽医部门及相关实验室的快速检测。