The present invention relates to a method for producing high-efficiency natural killer cells using radiation-irradiated peripheral blood mononuclear cells, and more particularly, to a method for producing high-efficiency natural killer cells using radiation-irradiated peripheral blood mononuclear cells (PBMC) (NK cells) prepared by the method of the present invention, and an anticancer cell therapeutic composition comprising the natural kill cell (NK cell). According to the present invention, NK cells activated with high efficiency by the combined use of radiation-irradiated peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and CD16 antibody without using tumor cells or genetically modified cells which are not considered to be safe as support cells Thereby providing a propagation method. NK cells having high purity and high cytotoxicity can be used as an active ingredient of a composition for treating cancer cells.본 발명은 방사선이 조사된 말초혈액단핵구을 이용한 고효율 자연살상세포의 제조방법에 관한 것으로, 더 구체적으로는 방사선이 조사된 말초혈액단핵구(PBMC)와 CD16 항체의 병용에 의해 고효율로 활성화된 NK 세포의 증식하는 방법, 및 이에 의해 제조된 자연살상세포(NK cell)을 포함하는 항암 세포치료제 조성물에 관한 것이다.본 발명에 따르면, 안전성이 문제되는 종양세포 또는 유전적으로 변형된 세포를 지지세포로 사용하지 않고 방사선이 조사된 말초혈액단핵구(PBMC)와 CD16 항체의 병용에 의해 고효율로 활성화된 NK 세포를 대량으로 증식 방법을 제공하는 것이다. 이렇게 대량으로 증식된 고순도 및 세포독성이 높은 NK 세포는 암면역 세포치료제 조성물의 유효성분으로 이용될 수 있다.