本发明涉及动物育种学、分子遗传学和分子生物学领域。具体涉及一种判定萧山鸡中B21血型的方法以及鉴定萧山鸡B21血型的试剂盒。该方法是以萧山鸡个体DNA作为模板,以SEQ ID NO.1和2的序列为引物进行PCR扩增;对扩增产物测序并根据微卫星LEI0258重复序列结构单元数目对不同萧山鸡个体进行判型。然后通过同种免疫、纯化等步骤制备B21血型特异性抗体血清,最后根据红血球凝集反应结果迅速判别出B21血型个体。本发明具备特异性高、操作相对简单且重复性高特点,为地方鸡血型的判定提供了技术支撑和应用参考。