本发明属于生物疫苗的技术领域,具体涉及一种RSV‑SH亚单位疫苗及其制备方法和应用。所述RSV‑SH亚单位疫苗为RSV的表面抗原蛋白与白细胞毒素的重组蛋白。所述表面抗原蛋白为SH蛋白,白细胞毒素为lktA多肽;所述RSV‑SH亚单位疫苗为RSV‑SH‑lktA重组疫苗,其核酸序列如SEQ ID NO.1所示。所述制备方法包括将RSV的表面抗原蛋白与白细胞毒素基因进行多级融合串联得到重组蛋白,所述多级融合串联的操作包括白细胞素lktA多肽的N端和C端分别或者同时串联1~6个SH短肽,所得到的疫苗表达量高,免疫原性好、疫苗制剂简单、制备成本低,能够有效的提高其免疫效果。