本发明提供了一种靶向钙网蛋白的纳米抗体及其应用,所述靶向钙网蛋白的纳米抗体的氨基酸序列的互补决定区为如SEQ ID NO:2所示的CDR1、如SEQ ID NO:4所示的CDR2、如SEQ ID NO:6所示的CDR3;或如SEQ ID NO:9所示的CDR1、如SEQ ID NO:11所示的CDR2、如SEQ ID NO:13所示的CDR3。本发明的204和215纳米抗体,通过与CRT结合情况的验证,显示了其与CRT蛋白具有很强的结合力,而且与CRT蛋白的亲和力均在纳摩尔水平,具有较高的亲和力;而且该纳米抗体更好的组织穿透性,可以使用大肠杆菌系统进行表达纯化,制备成本极大地降低。