本发明公开了一种喉鳞癌环状RNA分子标记物及其检测方法和应用。喉鳞癌环状RNA分子标记物hsa_circ_0000033的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;所述hsa_circ_0000033在喉鳞癌患者癌组织中的表达水平上调,应用于制备喉鳞癌辅助诊断试剂盒;本发明提供的喉鳞癌分子标记物表达量的检测方法是利用荧光染料法实时定量PCR检测,针对其设计的背靠背引物如SEQ ID NO.2‑3所示。本发明提供了靶向hsa_circ_0000033的特异siRNA序列,该siRNA用于敲降喉鳞癌细胞系中hsa_circ_0000033表达,发挥抑制喉鳞癌细胞系增殖能力的生物学功能;本发明的喉鳞癌分子标记物hsa_circ_0000033具有简单、快捷地进行喉鳞癌辅助诊断的应用前景;本发明设计的siRNA序列可有效使hsa_circ_0000033表达量降低,具有特异性及作用迅速的特点。