本发明公开了一种附着型慢病毒载体、制备方法及应用,属于生物技术领域。本发明中附着型慢病毒载体由pLRZM载体与包装系统共同转染宿主细胞获得,pLRZM载体为pLVX-IRES-ZsGreen1载体中土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件替换为人源性MAR序列或其95%以上同源序列所得,土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件序列如SEQ ID NO.2所示,人源性MAR序列如SEQ ID NO.3中第14~2161位碱基所示。该附着型慢病毒载体附着于宿主细胞染色体上,而非整合到宿主细胞染色体中,并且能够介导外源基因在哺乳动物细胞中稳定、高效、持久的表达,可用于基因治疗,具有广阔的市场前景。