Mycoplasma contamination of a known cell line is detected by collecting a Raman spectrum of a targeted volume within a sample, the targeted volume containing a known cell line of interest, obtaining a reference spectrum uniquely associated with the known cell line where the obtained reference spectrum is known to be free of mycoplasma and comparing, using a processing device, the reference spectrum to the collected spectrum. Mycoplasma is further detected by identifying whether there are unnatural molecular compositions within the collected spectrum based upon the comparison of the reference spectrum to the collected spectrum and providing an indication as to whether mycoplasma is detected in the collected Raman spectrum based upon whether unnatural molecular compositions are identified within the collected spectrum.La contamination par un mycoplasme d'une lignée cellulaire connue est détectée par le procédé consistant à enregistrer un spectre Raman d'un volume ciblé au sein d'un échantillon, ledit volume ciblé contenant une lignée cellulaire connue d'intérêt, à obtenir un spectre de référence exclusivement associé à la lignée cellulaire connue et dont on sait qu'il est exempt de mycoplasmes, et à comparer, au moyen d'un dispositif de traitement, le spectre de référence avec le spectre enregistré. Le mycoplasme est encore détecté en déterminant s'il existe des compositions moléculaires anormales au sein du spectre enregistré sur la base de la comparaison du spectre de référence avec le spectre Raman enregistré, l'identification de compositions moléculaires anormales dans le spectre enregistré indiquant la présence d'un mycoplasme.