Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) (RU)
发明人:
Козырь Арина Владимировна (RU),Колесников Александр Владимирович (RU),Лунева Нина Михайловна (RU),Хлынцева Анна Евгеньевна (RU),Шемякин Игорь Георгиевич (RU)
申请号：
RU2012141216/10
公开号：
RU2012141216A
申请日:
2012.09.27
申请国别(地区):
RU
年份:
2014
代理人:
摘要：
A method for the specific selection of high-affinity DNA molecules (DNA aptamers) for recombinant proteins, conducted from single-stranded oligonucleotide libraries, in relation to a recombinant target protein, characterized in that the recombinant target protein is synthesized as a single polypeptide chain with an amino acid sequence representing a unique amino acid sequence a protease cleavage site (lethal factor of Bacillus anthracis) and with a glutathione S-transferase sequence for binding a recombinant protein to paramagnetic particles ax with immobilized glutathione, which provides for the separation of oligonucleotides affinity for a given protein from non-affine in the fluid stream by retaining the polypeptide on paramagnetic particles in the field of action of the neodymium magnet, and subsequent cleavage of the recombinant protein with the associated oligonucleotides from the surface of the magnetic particles for the isolation and amplification of DNA sequences affinity for a recombinant target protein in a polymerase chain reaction, the processing of products of which 5'-exonuclease phage lambda results in a set of single-stranded DNA aptamers specific for the recombinant protein.Способ специфического отбора высокоаффинных молекул ДНК (ДНК-аптамеров) к рекомбинантным белкам, проводимого из одноцепочечных олигонуклеотидных библиотек, по отношению к рекомбинантному белку-мишени, отличающийся тем, что рекомбинантный белок-мишень синтезируют в виде единой полипептидной цепи с аминокислотной последовательностью, представляющей собой уникальный сайт, расщепляемый протеазой (летальным фактором Bacillus anthracis), и с последовательностью глютатион-S-трансферазы для связывания рекомбинантного белка на парамагнитных частицах с иммобилизованным глютатионом, предусматривающий сепарацию олигонуклеотидов, аффинных к данному белку, от неафинных в потоке жидкости за счет удержания полипептида на парамагнитных частицах, находящихся в поле действия неодимового магнита, и
