土壤中抗生素抗性基因的定量检测方法
- 专利权人:
- 浙江大学
- 发明人:
- 张奇春,侯昌萍
- 申请号：
- CN201410198989.1
- 公开号：
- CN103981263B
- 申请日:
- 2014.05.12
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2016
- 代理人:
- 金祺
- 摘要：
- 本发明公开了一种土壤中抗生素抗性基因的定量检测方法，包括以下步骤：1)、选用经常服用抗生素的猪，以猪粪DNA为模板，采用PCR扩增目的抗性基因片段；2)、切胶回收纯化扩增后的目的抗性基因，将抗性基因连接在T载体上，然后转化感受态大肠杆菌细胞，涂LB平板后挑选阳性克隆子；3)、用琼脂糖凝胶电泳检测扩大培养菌液的质量，选克隆成功的菌液提取质粒，检测质粒浓度，换算出质粒所携带抗性基因的拷贝数，并按10倍为稀释梯度稀释备用，作为抗性基因标准品；4)、提取土壤的基因组DNA，将土壤样品DNA和抗性基因标准品同时进行定量PCR扩增，从而最终得出土壤样品的抗性基因的拷贝数。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
