THE BOARD OF TRUSTEES OF THE LELAND STANFORD JUNIOR UNIVERSITY
发明人:
SANTIAGO, Juan, G.,SHINTAKU, Hirofumi
申请号：
USUS2015/010884
公开号：
WO2015/106146A2
申请日:
2015.01.09
申请国别(地区):
WO
年份:
2015
代理人:
摘要：
Devices and methods for preparing RNA and DNA from single cells are disclosed. In particular, the invention relates to a method of simultaneously extracting RNA and DNA from single cells and separating the nucleic acids electrophoretically. An electric field is used to lyse a single target cell, such that the plasma membrane is selectively disrupted without lysing the nuclear membrane. Cytoplasmic RNA is separated from the nucleus by performing isotachophoresis (ITP) in the presence of a sieving matrix that preferentially reduces the mobility of the nucleus. During ITP, the cytoplasmic RNA accumulates at an ITP interface between leading and trailing electrolytes and can later be extracted free of nuclear DNA. The method can be performed in a microfluidic device that fully automates all steps of the process.La présente invention concerne des dispositifs et des procédés de préparation dARN et dADN à partir de cellules uniques. En particulier, linvention concerne un procédé dextraction simultanée dARN et dADN dans des cellules uniques, et de séparation dacides nucléiques de manière électrophorétique. Un champ électrique est utilisé pour la lyse dune cellule cible unique, de manière à ce que la membrane plasmatique soit sélectivement rompue sans lyse de la membrane nucléaire. LARN cytoplasmique est séparé du noyau par isotachophorèse (ITP) en présence dune matrice de tamisage qui réduit de préférence la mobilité du noyau. Durant lITP, lARN cytoplasmique saccumule sur une interface ITP entre des électrolytes avant et arrière et peut ensuite être extrait sans ADN nucléaire. Ce procédé peut être réalisé dans un dispositif microfluidique qui automatise entièrement toutes les étapes du processus.
