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一种抗蓝耳病克隆猪的制备方法
专利权人:
中国农业大学;CHINA AGRICULTURAL UNIVERSITY
发明人:
LI, Ning,李宁,HU, Xiaoxiang,胡晓湘,CHEN, Jingyao,陈婧瑶
申请号:
CNCN2015/099835
公开号:
WO2016/110214A1
申请日:
2015.12.30
申请国别(地区):
CN
年份:
2016
代理人:
摘要:
The present invention provides a preparation method for an anti-porcine reproductive and respiratory syndrome cloned pig, comprising: transferring CRISPR/Cas9 targeting vectors and CD163 gene homologous recombination modification vectors into fibroblasts of a pig to obtain positive clone cells, a seventh exon of porcine endogenous CD163 gene being replaced with a tenth exon of human CD163-L1 gene, so that the positive clone cells are incapable of mediating invasions of PRRSV; taking the positive cell as nuclear transfer donor cells and oocytes as nuclear transfer recipient cells to obtain a cloned embryo by adopting a somatic cell nuclear transfer technology; impregenating a pig by transferring the cloned embryo into the uterus of the pig, to obtain a cloned pig.La présente invention concerne un procédé de préparation de porc cloné anti-syndrome dysgénésique et respiratoire porcin, comprenant : le transfert de vecteurs de ciblage de CRISPR/Cas9 et de vecteurs de modification par recombinaison homologue du gène CD163 dans des fibroblastes d'un porc pour obtenir des cellules de clone positif, un septième exon du gène CD163 endogène porcin étant remplacé par un dixième exon du gène CD163-L1 humain, de sorte que les cellules de clone positif sont incapables de médier des invasions du PRRSV ; la prise des cellule positives en tant que cellules donneuses par transfert nucléaire et d'ovocytes en tant que cellules destinatrices par transfert nucléaire pour obtenir un embryon cloné par adoption d'une technologie de transfert nucléaire de cellules somatiques ; la fécondation d'un porc par transfert de l'embryon cloné dans l'utérus du porc, afin d'obtenir un porc cloné.提供一种抗蓝耳病克隆猪的制备方法,采用CRISPR/Cas9打靶载体与CD163基因同源重组修饰载体共转入猪成纤维细胞中,获得阳性细胞克隆,阳性克隆中的猪内源CD163基因的第7个外显子被替换为人CD163-L1基因的第10外显子,使其不具有介导PRRSV入侵的能力;以阳性细胞为核移植供体细胞,卵母细胞为核移植受体细胞,通过体细胞核移植技术获得克隆胚胎;将克隆胚胎移入猪子宫内妊娠获得克隆猪。
来源网站:
中国工程科技知识中心
来源网址:
http://www.ckcest.cn/home/

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