HELMHOLTZ ZENTRUM MÜNCHEN DEUTSCHES FORSCHUNGSZENTRUM FÜR GESUNDHEIT UND UMWELT (GMBH)
发明人:
KÜHN, Ralf,WURST, Wolfgang
申请号：
EPEP2014/057283
公开号：
WO2014/167058A1
申请日:
2014.04.10
申请国别(地区):
WO
年份:
2014
代理人:
摘要：
The present invention relates to a method of producing a eukaryotic cell carrying a modified target sequence in its genome, the method comprising the step: (a) introducing into the cell a fusion protein comprising a DNA-binding domain of a Ralstonia solanacearum TALE-like protein (RTL) effector protein and a non-specific cleavage domain of a restriction nuclease or a nucleic acid molecule encoding the fusion protein in expressible form, wherein the fusion protein specifically binds within the target sequence and introduces a double strand break within the target sequence. The present invention further relates to the method of the invention, wherein the modification of the target sequence is by homologous recombination with a donor nucleic acid sequence further comprising the step: (b) introducing a nucleic acid molecule into the cell, wherein the nucleic acid molecule comprises the donor nucleic acid sequence and regions homologous to the target sequence. The present invention also relates to a method of producing a non-human mammal or vertebrate carrying a modified target sequence in its genome. Furthermore, the present invention relates to a fusion protein comprising a RTL effector protein and a non-specific cleavage domain of a restriction nuclease (RALEN).La présente invention concerne un procédé de production dune cellule eucaryote portant une séquence cible modifiée dans son génome, le procédé comprenant létape : (a) introduction à lintérieur de la cellule dune protéine de fusion comprenant un domaine de liaison à lADN dune protéine effectrice protéine de type TALE de Ralstonia solanacearum (RTL) et un domaine de clivage non spécifique dune nucléase de restriction ou dune molécule dacide nucléique codant pour la protéine de fusion sous sa forme exprimable, la protéine de fusion se liant spécifiquement à lintérieur de la séquence cible et introduisant une coupure double brin à lintérieur de la séquence cible. La présente invention concerne en outre le procédé d
