本发明属于动物传染病检测技术领域,具体涉及一种禽流感H5亚型病毒抗体快速定量检测试剂盒及其应用。本发明的试剂盒可对禽流感H5亚型病毒抗体进行实时、快速动态定量检测,对鸡群健康水平、免疫后的抗体水平监测具有重要意义。该试剂盒由试纸条与测试卡壳和样品稀释液组成,所述的试纸条由样品垫、吸收垫、涂覆有由保藏号为CCTCC M 2017471的大肠杆菌BL21/pSmart‑H5‑HA表达的HA蛋白‑胶体金标记物和兔IgG-胶体金标记物的结合垫,包被有禽流感H5亚型抗原蛋白HA的第一检测线和第二检测线,包被有羊抗兔IgG的质控线的硝酸纤维素膜,依次按吸收垫、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫的顺序粘贴在不吸水的支撑薄片上构成试纸条。