In accordance with the present invention, a large number of mesenchymal stem cells are produced in a short period of time in the absence of a heterologous derivatible material by incorporating a cell population containing mesenchymal stem cells in the presence of a fibronectin fragment.本発明によれば、間葉系幹細胞を含有する細胞集団をフィブロネクチンフラグメントの存在下で培養する工程を包含することで、異種由来成分不含培地で短期間に大量の間葉系幹細胞が製造される。