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一种制备增强型单体细菌荧光素酶luxAB的方法
- 专利权人:
- 西北农林科技大学
- 发明人:
- 沈锡辉,崔博宇,宋云洪,司美茹,王瑶
- 申请号：
- CN201310151132.X
- 公开号：
- CN104178463B
- 申请日:
- 2013.04.27
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2017
- 代理人:
- 摘要：
- 本发明公开了一种制备增强型单体细菌荧光素酶luxAB的方法，先获得目的基因；构建重组表达载体；获得含重组表达质粒的表达菌种；诱导靶蛋白的表达及蛋白的纯化；检测纯化的增强型单体细菌荧光素酶的活性。本发明利用融合型荧光素酶其独特的优势，将luxA和luxB基因异二聚体荧光素酶基因融合并经过易错PCR突变和化学随机突变，筛选得到9个荧光强度增强的突变体，然后经过shuffling技术，得到一个增强型单体细菌荧光素酶基因luxAB，将其克隆到表达载体pET28a上，转化至BL21(DE3)菌株中表达，并用温和破碎法裂解细胞，纯化表达产物，得到增强型单体细菌荧光素酶，本发明的方法过程简单、生长周期短、成本低廉、易于纯化、酶活性损失小，性能稳定，具有重要的实际应用价值。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
