本发明公开了一种检测番茄斑萎病毒的RT-HDA引物,试剂盒及方法,所述引物为序列表SEQ ID NO:1和SEQ ID No:2所示的寡核苷酸序列。所述的试剂盒包含如下组分:1)RT-HDA扩增反应液;2)无RNA酶的去离子水,作为空白对照;3)阳性对照样品:含番茄斑萎病毒RNA模板;4)阴性对照样品:不含番茄斑萎病毒的健康番茄组织RNA模板;检测方法包括下列步骤:1)待检样品RNA提取,2)番茄斑萎病毒RNA进行RT-HDA扩增;3)电泳检测结果及描述及判定。本发明的HDA检测方法更快、更快捷,安全可靠,与PCR相比不需要PCR仪,设备要求简单,适用于对番茄斑萎病毒进行快速检测确证,可广泛应用于农业生产及环境中的疫情监控及进出口贸易中该类病毒的监测及检测。