本发明公开了一种小鼠CT26结直肠癌治疗性肿瘤多肽疫苗制剂,包含抗原表位组合物和佐剂,抗原表位组合物包括7条CT26 CD8 T细胞表位的多肽片段(如SEQ ID NO:1‑7所示)与4条CT26 CD4 T细胞表位的多肽片段(如SEQ ID NO:8‑11所示)。为改进其他CT26肿瘤疫苗的治疗效果的新途径,提高了肿瘤生长的抑制效果,适合用于其他类型的抗肿瘤药物的联合治疗进行探索。本发明同时还公开了该多肽疫苗制剂的制备方法,包括:肿瘤新生抗原预测、筛选、鉴定、多肽疫苗制剂开发、多肽疫苗制剂体内药效测试和药效动力学测试。