本发明公开了一种烟草eIF4E‑1突变位点特异性共显性分子标记,与野生型位点检测相关的标记命名为ASM‑W,片段大小543bp,如SEQ ID No.1所示;对应的碱基插入突变位点检测相关的标记命名为ASM‑m,片段大小543bp,如SEQ ID No.2所示。本发明还公开了一种用于鉴别上述突变位点特异性共显性分子标记的引物,引物序列如SEQ ID NO.3、4、5所示。利用该标记和引物可以对PVY抗性供体亲本的回交转育后代的基因型进行准确选择。本发明的标记和引物可以作为分子标记应用于烟草种质资源鉴定和育种辅助选育,选择含有开阳小黑烟eIF4E‑1突变类型的种质材料或转育后代。