本发明涉及一种哈氏弧菌外膜蛋白亚单位佐剂疫苗,具体涉及哈氏弧菌外膜蛋白亚单位佐剂疫苗及规模化制备技术。本发明所述哈氏弧菌外膜蛋白亚单位佐剂疫苗,包括以下组分:哈氏弧菌外膜蛋白Ompk、Montanide ISA 763A(763A)佐剂。本发明还提供了所述的哈氏弧菌外膜蛋白亚单位佐剂疫苗规模化制备方法。其特征在于:通过携带含有弧菌外膜蛋白Ompk基因质粒的大肠杆菌(工程菌)以500L发酵罐高密度培养与诱导表达,提取纯化得到弧菌外膜蛋白Ompk,与Montanide ISA 763A(763A)按照一定比例乳化,无菌分装,制成弧菌外膜蛋白Ompk佐剂疫苗成品。该疫苗对斜带石斑鱼、鲫鱼注射免疫保护率达到60%以上。