Provides an ex vivo expansion method for a cord blood NK cell, and a kit and application thereof. The ex vivo expansion method for the cord blood NK cell comprises: separating a cord blood monocyte; activating, culturing, and proliferation; and culturing of the cord blood NK cell. The invention does not require cell sorting and does not require a trophoblast. A reagent in the kit does not contain animal-based component. The invention provides a high production volume of the NK cell. The cord blood NK cell obtained has at least 90% purity, a total cell count of up to 1010-11 per part of cord blood, and can kill a tumor cell effectively.La présente invention décrit un procédé d'expansion ex vivo destiné à une cellule NK du sang ombilical, et une trousse et une application associées. Le procédé d'expansion ex vivo concernant la cellule NK du sang ombilical comprend : la séparation d'un monocyte de sang du cordon ; l'activation, la culture, et la prolifération ; et la culture de la cellule NK du sang du cordon. L'invention ne nécessite pas de tri des cellules et ne nécessite pas de trophoblaste. Un réactif dans la trousse ne contient pas de constituant provenant d'un animal. L'invention fournit un volume de production élevé de la cellule NK. La cellule NK du sang du cordon obtenue présente au moins 90 % de pureté, une numération totale des cellules allant jusqu'à 1010-11 par partie de sang du cordon, et peut tuer de manière efficace une cellule tumorale.提供脐血NK细胞的体外扩增方法及其试剂盒与应用,脐血NK细胞的体外扩增方法包括分离的脐血单个核细胞、活化培养和增殖培养脐血NK细胞。本发明不需要细胞分选,不需要滋养层细胞,所用试剂不含动物源成分,NK细胞产量高,获得的脐血NK细胞的纯度达90%以上,细胞总数可达10 10-11个/份脐血,对肿瘤细胞的杀伤力高。