本发明公开了抗蜂王浆主蛋白3的单克隆抗体及检测蜂王浆主蛋白3的酶联免疫试剂盒。本发明以SEQ ID No.1所示序列为抗原采用细胞融合得到阳性细胞株112株,通过交叉反应检测获得14株融合细胞株,经过三轮亚克隆挑选其中亲和力更高的7株进行抗体表位检测和配对实验,标曲绘制及样本测定结果发现,其中的3G4与2D2这两株有较好的线性关系且灵敏度高;本发明进一步将其构建双抗体夹心ELISA法检测蜂王浆主蛋白3的酶联免疫试剂盒。本发明酶联免疫试剂盒特异性检测MRJP3且与其他相关蛋白无交叉反应,检测范围为0.78ng/mL‑50ng/mL,检测灵敏度为194pg/mL,精密度高,批间差小。