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一种利用大肠杆菌表达烟草富含甘氨酸RNA结合蛋白的方法
专利权人:
云南省烟草农业科学研究院
发明人:
李文正,陈禹保,刘勇,陈学军,卢秀萍,唐启慧
申请号:
CN201010110901.8
公开号:
CN101824429B
申请日:
2010.02.21
申请国别(地区):
中国
年份:
2012
代理人:
摘要:
本发明公开了一种利用大肠杆菌表达烟草富含甘氨酸RNA结合蛋白(GRP)的方法,包括表达菌株筛选、培养基优化、蛋白提取缓冲液配制,其特征在于:具体包括下列工序:A、提取烟草总RNA,逆转录成cDNA,PCR扩增出GRP蛋白基因;B、构建重组表达质粒pGEX4T-1-GRP;C、转化大肠杆菌表达菌株、小量诱导筛选高效表达菌株、大量诱导表达;D、蛋白提取和E、蛋白活性鉴定。本发明通过筛选大肠杆菌高效表达菌株,优化培养基,克隆基因构建出GRP基因重组表达质粒pGEX4T-1-GRP,再用阳性质粒对菌种为rosetta的大肠杆菌菌株进行转化,并采用优化的专用培养基LinA培养、缓冲液TKM,筛选出了高效表达菌株,从而提高了烟草中富含甘氨酸RNA结合蛋白的表达效率。本发明具有成本低、操作简单、生产周期短、适于大规模生产、蛋白表达率高、活性强,易于纯化、不易降解的优点。
来源网站:
中国工程科技知识中心
来源网址:
http://www.ckcest.cn/home/

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