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一种利用大肠杆菌表达烟草富含甘氨酸RNA结合蛋白的方法
- 专利权人:
- 云南省烟草农业科学研究院
- 发明人:
- 李文正,陈禹保,刘勇,陈学军,卢秀萍,唐启慧
- 申请号：
- CN201010110901.8
- 公开号：
- CN101824429B
- 申请日:
- 2010.02.21
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2012
- 代理人:
- 摘要：
- 本发明公开了一种利用大肠杆菌表达烟草富含甘氨酸RNA结合蛋白(GRP)的方法，包括表达菌株筛选、培养基优化、蛋白提取缓冲液配制，其特征在于：具体包括下列工序：A、提取烟草总RNA，逆转录成cDNA，PCR扩增出GRP蛋白基因；B、构建重组表达质粒pGEX4T-1-GRP；C、转化大肠杆菌表达菌株、小量诱导筛选高效表达菌株、大量诱导表达；D、蛋白提取和E、蛋白活性鉴定。本发明通过筛选大肠杆菌高效表达菌株，优化培养基，克隆基因构建出GRP基因重组表达质粒pGEX4T-1-GRP，再用阳性质粒对菌种为rosetta的大肠杆菌菌株进行转化，并采用优化的专用培养基LinA培养、缓冲液TKM，筛选出了高效表达菌株，从而提高了烟草中富含甘氨酸RNA结合蛋白的表达效率。本发明具有成本低、操作简单、生产周期短、适于大规模生产、蛋白表达率高、活性强，易于纯化、不易降解的优点。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
