The present invention utilizes the CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas9 system to specifically target the TP53 gene, a representative tumor suppressor gene in a dog model, and a TP53 knock-out dog constructed by applying the same It relates to a cell line and a technology for using it in tumor research. The guide RNA (gRNA) of the present invention can specifically target only dog TP53 genes, and when such specific gRNA is introduced into the CRISPR/Cas9 system, dog TP53 genes are specifically targeted without an off-target effect. It can be knocked out as an enemy. Therefore, the CRISPR/Cas9 system to which gRNA specifically targeting the dog's TP53 gene is applied can be usefully used to create dog cell models and animal models for various tumor-related studies related to inactivation of the TP53 signaling system. In addition, TP53 knockout cells constructed with the canine TP53 gene-specific CRISPR/Cas9 system can be used as a research model for the study of the mechanisms of tumor generation and malignancy of various oncogenes related to canine tumors, and as a related anticancer drug test model.본 발명은 CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas9 시스템을 활용하여 개 모델에서 대표적인 종양 억제 유전자인 TP53 유전자를 특이적으로 표적하는 기술과 이를 적용하여 구축한 TP53 넉아웃 (knock-out) 개 세포주 및 이를 종양 연구에 활용하는 기술에 관한 것이다. 본 발명의 가이드 RNA (gRNA)는 개의 TP53 유전자만을 특이적으로 표적할 수 있는바, 이러한 특정 gRNA를 CRISPR/Cas9 시스템에 도입하는 경우 오프-타겟 효과(off-target effect) 없이 개의 TP53 유전자를 특이적으로 넉아웃(knock-out) 시킬 수 있다. 따라서, 개의 TP53 유전자를 특이적으로 표적하는 gRNA가 적용된 CRISPR/Cas9 시스템은 TP53 신호체계 불활성화와 관련된 다양한 종양 관련 연구를 위한 개 세포 모델과 동물모델을 제작하는데 유용하게 사용될 수 있다. 또한, 개 TP53 유전자-특이적 CRISPR/Cas9 시스템으로 구축한 TP53 넉아웃 세포는 개의 종양과 관련된 다양한 종양유전자의 종양 생성 및 악성화 기전연구를 위한 연구 모델과 이와 관련한 항암제 테스트 모델로 활용할 수 있다.
