本发明公开大肠杆菌O157:H7亲和十二肽及其筛选方法和应用,其氨基酸序列为SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.4任一所示。本发明以食源性致病菌大肠杆菌O157:H7为靶标进行筛选,获得针对大肠杆菌O157:H7全细胞亲和性较强的几段多肽,丢弃筛选所用离心管的负筛选步骤减少了离心管材料聚苯乙烯PS对筛选结果的影响;所筛选得到的包含亲和多肽的噬菌体单克隆对大肠杆菌O157:H7具备强于原始肽库的亲和力;筛选得到的四段多肽具备在大肠杆菌O157:H7细胞表面富集的特征,利用大肠杆菌O157:H7亲和十二肽制备获得的新型溶菌酶具备靶向亲和到大肠杆菌上的效果,具有较高酶活。