牛副流感病毒3型病毒nano‑PCR检测试剂盒及其制备方法,涉及牛副流感病毒检测领域,解决了现有牛副流感病毒3型病毒检测方法存在的灵敏性低、血清学检测假阳性高、国外进口试剂昂贵的问题。该试剂盒包括MightyAmp酶、2xBuffer Mix缓冲液、金纳米颗粒溶胶、无菌双蒸水、一对特异性引物P1(5'‑GCTCTTCTCTTTTTGTCCCATTCTT‑3')、P2(5'‑AACCCCTTCCTCAATCCTGATATAC‑3')和一个牛副流感病毒3型病毒阳性对照质粒;牛副流感病毒3型病毒阳性对照质粒的序列如SEQ ID NO:2所示。本发明的试剂盒灵敏度高、简便、快速高效,成本较低。