本发明公开一种针对DD3基因的小干扰RNA及其表达载体构建与应用。其正义链序列为SEQ ID NO.1;反义链序列为SEQ ID NO.2;并成功构建了pGLV3/H1/GFP+Puro Vector-DD3-siRNA真核表达载体。本发明将成功构建的真核表达载体感染LNCaP细胞及RWPE-1细胞,结果显示,DD3基因被干扰后能明显降低LNCaP细胞增殖速率,而对RWPE-1细胞无明显影响;将成功构建的真核表达载体注射到前列腺癌动物实体瘤中,结果显示,DD3基因被干扰后能有效抑制LNCaP细胞实体瘤的增殖。因此,通过siRNA干扰DD3基因在前列腺癌细胞中的表达,从而抑制了癌细胞的增殖。