本发明公开了一种重组猪/牛源大肠杆菌耐热肠毒素(STp)融合蛋白STp5‑His、抗该蛋白的单克隆抗体及其应用,本发明中所述的融合蛋白STp5‑His的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示,编码所述融合蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明中猪/牛源大肠杆菌耐热肠毒素STp成熟肽基因(estp)经过4次串联后表达出融合蛋白STp5‑His,使原本不具有免疫原性的天然STp蛋白具有了良好的免疫原性。本发明采用细胞融合技术制备出针对该融合蛋白STp5‑His和天然STp的特异性单克隆抗体,解决了生产实践中无法对STp进行检测的难题,且该特异性单克隆抗体能够在体外中和天然STp,具有临床应用的前景。