一种利用CRISPR/Cas9技术基于SSA修复的基因无缝编辑方法

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专利权人:

西北农林科技大学

发明人:

张智英,白义春,徐坤,魏泽辉,和林洁,任充华,邵斯旻,吴芸,刘中天

申请号：

CN201610333062.3

公开号：

CN106011171A

申请日:

2016.05.18

申请国别(地区):

中国

年份:

2016

代理人:

刘震

摘要：

本发明主要属于基因编辑技术领域，具体涉及一种利用CRISPR/Cas9技术基于SSA修复的基因无缝编辑方法。所述基因无缝编辑方法首先构建靶向CCR5和eGFP的CRISPR/Cas9表达载体CCR5. CRISPR/Cas9和eGFP.CRISPR/Cas9，并构建供体CCR5‑Donor载体，所述CCR5‑Donor质粒载体具有pXL‑BACII‑L‑arm‑CAG‑TK‑PGK‑Puro^R‑T2A‑eGFP‑bGH pA ‑R‑arm结构，其中，L‑arm和R‑arm为左右同源臂，L‑arm和R‑arm中间的CAG‑TK‑PGK‑Puro^R‑T2A‑eGFP‑bGH pA为筛选标记组件；通过两次转染，利用CRISPR‑Cas9系统及细胞内的HR和SSA修复机制，通过细胞的嘌呤霉素和更昔洛韦正负向筛选，完成无缝编辑。

来源网站：

中国工程科技知识中心

来源网址：

http://www.ckcest.cn/home/